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蛋白質(zhì)電泳分子量標(biāo)準(zhǔn)試劑實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

更新時(shí)間:2024-02-29    點(diǎn)擊次數(shù):1385

  蛋白質(zhì)電泳分子量標(biāo)準(zhǔn)試劑實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)


  1) 由于細(xì)胞凋亡是一個(gè)快速的過程,建議樣品在染色后1小時(shí)之內(nèi)進(jìn)行分析。

  2) 對(duì)于貼壁細(xì)胞,消化是一個(gè)關(guān)鍵步驟。貼壁細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡時(shí)如有漂浮細(xì)胞,需收集漂浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞后合并染色。處理貼壁細(xì)胞時(shí)要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。胰酶消化時(shí)間過短,細(xì)胞需要用力吹打才能脫落,容易造成細(xì)胞膜的損傷, 蛋白質(zhì)電泳分子量標(biāo)準(zhǔn)試劑PI攝入過多;消化時(shí)間過長,細(xì)胞膜同樣易造成損傷,甚至?xí)绊懠?xì)胞膜上磷脂酰絲氨酸與Annexin V-FITC的結(jié)合。消化時(shí)將胰酶鋪滿孔板底后,輕搖時(shí)胰酶與細(xì)胞充分接觸,然后倒掉大部分胰酶,利用剩余的少量胰酶再消化一段時(shí)間,待細(xì)胞間空隙增大,瓶底呈花斑狀即可終止。在消化液中盡量不用EDTA,EDTA會(huì)影響Annexin V與PS的結(jié)合。


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  3) 實(shí)驗(yàn)中如需要固定細(xì)胞,比如在檢測凋亡的同時(shí)檢測細(xì)胞周期,只能選用Annexin V-FITC,而不能選用Annexin V-EGFP,因?yàn)樵诠潭ㄟ^程中EGFP會(huì)變性導(dǎo)致喪失激發(fā)熒光的能力。固定前需要先將細(xì)胞與Annexin V-FITC進(jìn)行孵育,并用binding buffer洗掉未結(jié)合的Annexin V-FITC。因?yàn)楣潭ㄟ^程中細(xì)胞通透性增加會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞碎片,可以和Annexin V結(jié)合,對(duì)結(jié)果產(chǎn)生干擾。

  4) 如果樣品來源于血液,請(qǐng)務(wù)必除去血液中的血小板。 蛋白質(zhì)電泳分子量標(biāo)準(zhǔn)試劑因?yàn)檠“搴蠵S,能與Annexin V結(jié)合,從而干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果??梢允褂煤?strong>EDTA的緩沖劑并在200 g離心洗去血小板。

  5) 試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底,避免開蓋時(shí)液體灑落。

  6) Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。

  注:以上資料僅供參考!

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